ساخت سازهpEGFP-ChEgTrp به عنوان مدل DNA واکسن چند اپیتوپی علیه اکینوکوکوس گرانولوزوس

 زمینه: آلودگی با لارو انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس سبب بیماری هیداتیدوزیس در انسان و نشخوارکنندگان می­شود. با توجه به شیوع بالای این آلودگی در ایران، مقابله با آن از لحاظ بهداشت جامعه اهمیت خاصی دارد.   هدف: مطالعه به منظور تولید و ساخت سازه pEGFP-ChEgTrp به عنوان مدل DNA واکسن چند اپیتوپی علیه انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس انجام شد.   مواد و روش­ها: این مطالعه تجربی در سال 1392در مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم ­ سازی رازی کرج انجام شد. ابتدا اپیتوپ­های تحریک­کننده سیستم ایمنی میزبان با استفاده از پایگاه اطلاعاتی IEDB پیش­بینی و توالی کد­کننده آن ساخته شد. سپس این توالی با استفاده از واکنش PCR تکثیر شد. محصول PCR پس از هضم آنزیمی با آنزیم محدود­کننده Xho I در وکتور pEGFP-N1 کلون شد و باکتری حاوی پلاسمید نوترکیب با روش­های مختلف از قبیل PCR Colony ، الکتروفورز آگارز ژل و توالی­یابی بررسی گردید.   یافته­ها: تعداد 4 پپتید حاوی 10 اپیتوپ خطی در آنتی­ژن EgTrp پیش­بینی شد. توالی نوکلئوتیدی کد­کننده ChEgTrp با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و با روش PCR تکثیر و قطعه­ای شامل 270 جفت باز حاصل شد. قطعه مورد نظر وارد وکتور pEGFP-N1 گردید و پلاسمید نوترکیب با روش Colony PCR و الکتروفورز آگارز ژل تأیید شد. برای تأیید نهایی، پلاسمید نوترکیب توالی­یابی و به این ترتیب سازه ژنتیکی pEGFP-ChEgTrp ساخته شد . نتیجه­گیری: قطعه ChEgTrp به طور موفقیت­آمیزی در وکتور pEGFP-N1 کلون شد و این پلاسمید می­تواند جهت ساخت DNA واکسن استفاده شود.